En este v铆deo vamos a explicar las
soluciones a las preguntas
y cuestiones planteadas en la
pr谩ctica para la determinaci贸n
y cuantificaci贸n de inmunoglobulinas
en la saliva
mediante la t茅cnica de Lisa.
En la explicaci贸n de la introducci贸n,
si se dec铆a que la inmunoglobulinas
es la mayoritaria en las secreciones
y existe una patolog铆a que
la deficiencia selectiva
igea que es un embudo,
dif铆cil de primaria,
que se explicaba que era
la m谩s frecuente,
esta es una de las preguntas que
se hac铆an en la pr谩ctica,
la mayor铆a de las personas afectadas.
Son asintom谩ticos estas
preguntas y bueno,
y algunos s铆 que son afectados,
que puede llegar
a haber consecuencias graves
en alguno de ellos,
y las infecciones m谩s recurrentes
son el tracto digestivo respiratoria,
pues otra posible pregunta
en los cuestionarios
respecto a la t茅cnica que se
coment贸 en la pr谩ctica,
que hab铆a varios tipos.
En concreto,
en esta se utilizaron un
tipo sandwich directo
y se va a venir Igea en
saliva en la t茅cnica,
y esa es siempre un soporte
s贸lido que se puede unir,
o bien el ant铆geno del anticuerpo en
nuestro caso es el anticuerpo anti
inmunoglobulinas humana por
tanto la capa de captura
tenemos la inmunoglobulinas a
humana en la capa problema,
tenemos nuestras muestras de saliva
o bien las muestras, patr贸n,
y, en la capa de detecci贸n tenemos
el anticuerpo anti
inmunoglobulinas humana, unido al
enzima a la oxidaci贸n Vanesa
son selectivamente, aleatoriamente,
le habr谩 tocado alg煤n estudiante
alguna de estas tres preguntas?
Este es el esquema resumido de
el protocolo de realizaci贸n
de la pr谩ctica,
donde primero se se tapizan con
el anticuerpo de captura.
Esta ser铆a la capa de captura
despu茅s de incubar toda la noche
y lavar se a帽ade las muestras.
Este problema despu茅s de
encubrir elaborar,
se a帽adir铆a.
La capa de detecci贸n, es decir,
al anticuerpo con la despu茅s.
Y se producir铆a,
si apareciera un producto que
tiene color, las se medir铆a
y se representar铆a la concentraci贸n
respecto a la observancia,
pudiendo trazar una recta
de calibrado
y un rango de sensibilidad sobre
el cual podr铆amos extrapolar
los valores de observancia de
las muestras problemas
y dar un valor.
Una de las preguntas que os hacen es
cu谩l es la concentraci贸n del
anticuerpo de captura.
Algunos me hab茅is dicho 400.
Evidentemente 400 es el dial de
anticuerpo de captura que os damos,
pero no es el la concentraci贸n
que aparecen los pozos
y ahora ten茅is que calcular c贸mo
ya pusimos en la introducci贸n.
Se utiliza la f贸rmula de
concentraci贸n por volumen.
Concentraci贸n inicial en
la que est谩bamos.
El tubo es de 400 microgramos
mililitros
el volumen que ten茅is que a帽adir;
es 38.000 litros;
y el volumen finales,
2.476 micr贸metros,
solamente tienes que aplicar la
f贸rmula de la concentraci贸n
que sale es seis con 14 microgramos
mililitro que esa es la respuesta
a la pregunta.
A qu茅 concentraci贸n de anticuerpos
se trabajan en el ensayo para
el anticuerpo de detecci贸n,
es decir, la capa de detecci贸n
os vuelven a os?
Preguntan en este caso
el volumen que estamos utilizando
entonces aplicando la f贸rmula;
igualmente el volumen final es dos
con seis la concentraci贸n
que queremos preparar, estilo
24.000 mililitros
y c贸mo el vial que proporcionaba
majestad acero,
ocho microgramos mililitros la
煤nica inc贸gnita que ten茅is
que despejar es cu谩nto volumen
tienes que coger de este tubo
para preparar vuestra disoluci贸n y
la respuesta es 78 mililitros.
El volumen final est谩 compuesto
por el volumen de tamp贸n
y el volumen de anticuerpo;
por tanto, si dos con seis
el volumen final,
el volumen se desea que ten茅is
que a帽adir; uno con 82,
a帽adirle 78 tener ya dos con seis
litros de la anticuerpo de detecci贸n
para preparar la mezcla, que
lleva sustrato y sustrato,
como la enzima, de la penosidad,
sustratos.
El per贸xido de hidr贸geno y homog茅neo
es la 1, dos feliz
ni a Mina, que es el que tiene
color amarillo naranja
cuando se oxiden este
sustrato homog茅neo;
viene en pastillas.
En comprimidos que pesan 20
miligramos mililitros
como ya explicamos en la
introducci贸n, lo que nos pide;
la pr谩ctica es calcular o preparar
el cromosoma nacer o cinco miligramos
-mililitros y por tanto
necesitamos saber
qu茅 volumen de disolvente tenemos
que a帽adir para prepararlo.
Se le sustituye la f贸rmula
-concentraci贸n m谩s polvo,
uno menos y por tanto,
tenemos la respuesta al
volumen final total
que necesitamos para diluir ese
comprimido ser铆an 40 mililitros;
si no hubiera otro susto; si no
hubiera otra mol茅cula m谩s,
se har铆a directamente, pero
necesitamos el sustrato
de la reacci贸n, que es el
per贸xido de hidr贸geno.
Por tanto, en este volumen final
van a participar, el trato
que se diluye
y el volumen que va a ocupar el
per贸xido de hidr贸geno vale.
Esto est谩 en polvo; tenemos que
tener en cuenta la masa,
pero el per贸xido de hidr贸geno ya
viene disuelto; diluida en agua
y, por tanto, tenemos un
valor de concentraci贸n
para calcular qu茅 volumen
necesitamos,
pues aplicamos nuevamente la f贸rmula.
La concentraci贸n original
es tres por 100.
Volumen, volumen.
El volumen inicial es lo
que queremos saber.
Cu谩nto volumen tiene que coger de
hidr贸geno para preparar un volumen
final de 40 ml que este dato lo
calculado a partir de la dos fines
de Amina y la concentraci贸n final
que me piden es cero puntos a 5,
porcentaje; volumen, monumento,
es un dato de concentraci贸n,
es una unidad de medida
de concentraci贸n.
Solo ten茅is que sustituir
despejar la f贸rmula
y obtener que el volumen de per贸xido
de la disoluci贸n de hidr贸geno,
que necesit谩is es como
a seis 7.000 litros.
Entonces, en el volumen final,
que son 40 mililitros
pero 6, 6, siete mililitros son
de la disoluci贸n de hidr贸geno
por tanto restantes
y el volumen restante hasta 40.
Es decir, 39 contactos, 33
de volumen de trato,
en la pr谩ctica, si os dice
que los comprimidos,
no aportan volumen para que no
tienes que tener que tenerlo en cuenta.
Una vez que tenemos todo el
proceso experimental
realizado la reacci贸n, se detiene
con 谩cido sulf煤rico
y tenemos est谩 en los pozos con este
color amarillo anaranjado
donde hay producto y se introduce
en el espectro fot贸metro.
En este caso es un lector
de placa de lista
para que mida lapso a 400
no aumenta nan贸metros
en cada uno de los.
Cuando el aparato mide.
Nos da 1.
Nos imprime podemos imprimir
un papel.
No nos salen en pantalla la lectura
de cada uno de ellos
solamente os represento la lectura
de los que tienen volumen.
El resto ser铆a hacer.
Entonces lo que tenemos que hacer
es con estos datos que aparecen
en la pr谩ctica no obtener ese anexo
uno el ejemplo de el resultado.
Que se obtendr铆a de este ensayo
pues ten茅is que localizar
e identificar el valor de de
cada uno de los pasillos.
Os acord谩is?
Ten铆amos marcado en los grupos de 3.
La recta patr贸n est谩 marcada
en rojo de los de la f
uno dos porque iban por
duplicado el alumno;
uno aparecen azul el dos en
verde y el tres en rosas
y que lo que hacemos es.
Marcarnos para saber a qui茅n.
Corresponde cada uno de esos
valores; a continuaci贸n,
rellenamos la tabla que nos plantea
la pr谩ctica colocando,
identificando cada uno de los
valores con el pozo que corresponde.
Vale.
Pasamos los datos a la tabla
y ahora lo que hacemos
son los c谩lculos de las media neta
que necesitamos para poder hacer
la representaci贸n gr谩fica.
Entonces El Pozo y yo.
F 1.
F dos son los valores del blanco,
y para realizar los c谩lculos con
las organzas media neta
necesitamos saber las
media del blanco
y restarse al resto de ellos.
As铆 que se hace el c谩lculo.
Por tanto, el blanco.
La concentraci贸n cero de
inmunoglobulinas equivale
a la solvencia de cobro.
Entonces estos son los datos
con los que tenemos
que trabajar media neta con
los datos de la recta,
de la hemoglobina concentraci贸n
conocida.
Se va a dibujar los datos
de la gr谩fica
y cuando se tengan entonces vamos a
llevar nuestros datos problema
para calcular a qu茅 concentraci贸n
equivale a ese valor de entonces.
Cogemos los datos de
la muestra patr贸n,
los tenemos aqu铆 las canciones
tenemos aqu铆 nuestra gr谩fica.
Acordaron concentraci贸n y lineal
las como comentaban
-los valores de los.
Pod茅is dibujar en la escalada
siempre lineal,
pero la separaci贸n como quer谩is,
los que deb茅is hacerlo gr谩fica,
lo m谩s ancha posible,
que no nos todos los datos
en la parte de abajo.
Entonces, uno de los un ejemplo
de c贸mo ha distribuido esto,
pod铆a llegar a 1.
Cada uno puede hacer
con lo que quiera,
siempre y cuando se respeten los
valores y la genialidad.
Vale, en este caso yo aqu铆 dibujado
que el m谩ximo ser 8.
Por tanto, la mitad ser铆a 0.
4, por tanto, a la mitad
ser铆an cerdos.
Estos ser铆an los valores
de estos puntos
y una vez que los tengo pues c谩lculo.
La distancia que hay entre
esta estrella este
y entonces poco los datos de lo
primero es poner mi escala,
determinar el m谩ximo
y poner los datos,
bien puestos, haciendo los c谩lculos
bien para que la representaci贸n
sea correcta y despu茅s lo
que hacemos es proceder
a ir poniendo cada uno de los
datos sobre la gr谩fica.
Bien, pues empezamos
por el valor cero
nanogramos mililitros la solvencia
que tienen es de cero uno uno cuatro
vale pues buscamos el valor lo
pintamos vale este punto
es el valor de uno Tiene una
observancia de cero con 198,
pues aqu铆 tenemos el 1, nos vamos
a hacer realmente y 8,
se dibuja en otro punto el de 10,
es decir, y el tenis.
Vale?
Pues ya tenemos cada
uno de los puntos
y unimos un trazo sobre cada
uno de esos puntos
y obtenemos una curva,
se donde hay al principio de la
concentraci贸n no es suficiente
para que sea proporcional.
Llega un momento que la
cantidad de Igea
empieza a tener un producto de color
que empieza a ser proporcional.
Hay una parte lineal
en donde conforme se aumenta la
concentraci贸n, aumenta el color,
el producto, las organzas y llega
un momento que se satura.
Ya no hay m谩s encima
y, por m谩s que a帽adamos sustrato,
no va a haber m谩s producto,
vale?
En esta parte, la l铆nea
ya est谩 saturada
y hace como una muy bueno pues ya
tenemos nuestra gr谩fica dibujada.
Ahora necesitamos una vez que hemos
visto cu谩l es la parte lineal,
hacer la recta trazar la
recta de calibrado
y determinar los l铆mites de
sensibilidad de nuestro ensayo.
Bien, pues esto es la zona
lineal y, por tanto,
ajustamos una recta a
los tres puntos,
en este caso que los he dibujado,
un poco que separaba la recta.
En este caso no hay encima
ninguno de los tres
pero deja aproximadamente
izquierda a derecha.
La misma distancia 茅sta ser铆a
nuestra recta de calibrado,
y la rango de detenci贸n de este
ensayo ser铆a los valores,
dentro de los cuales somos capaces
de dar un valor de concentraci贸n
con exactitud, es decir,
que en el rango entre dos
seis todos los valores
de entren en este rango van
a caer en la zona lineal
y, por tanto, para esa vamos a poder
dar un valor de concentraci贸n
esa es mi rango de sensibilidad
y yo puedo medir
de uno hacienda mililitros y
el rango de sensibilidad;
observancia ser铆a desde
cero 98 acero, con 5,
8, ocho por encima de ese valor
o por debajo de ese valor
no podemos dar un dato
de concentraci贸n
con esa actitud vale,
podr铆amos decir que es menor que
mi rango de sensibilidad.
Si es por debajo de 0, dos menor
de un nanogramos mililitros
y si est谩 por encima los valores que
est茅n por encima de su hermano,
de 5, 8, ocho no podemos dar
el dato con esta actitud,
pero podemos decir que son mayores
de el l铆mite superior, que es bueno.
Una vez que tenemos nuestra
gr谩fica dibujada,
la recta de calibrado, calculada
y los rangos de sensibilidad
del ensayo determinados.
Pasamos a calcular la concentraci贸n
de nuestra muestra,
la tabla.
Tenemos los valores de neta
de cada uno de los y lo que
hacemos es dibujarlo;
en primer lugar, alumno, uno
saliva a una diluci贸n
unos 50 es cero con cinco uno
tres ocho buscamos el valor
en la gr谩fica y extrapolar,
los llevamos a la a d贸nde corta
la recta de calibrado,
y vemos en qu茅 punto corta.
En el eje de las equis,
un error frecuente
como sab茅is, esto es,
si esto es bueno,
yo estoy 10.
El siguiente n煤mero es el 2, 3, 4,
si estos 10 estos tienen.
El siguiente n煤mero es 20, 30, 40.
Por tanto, el punto de
corte en el eje
para el primer para nuestra primera
muestra ser铆a, pues entre 30 40,
los 38 nanogramos mililitro
el alumno 1,
la muestra que est谩 diluida a 1.500.
El valor de fiestero con cero 4, 1,
8, por tanto est谩 por debajo,
estar铆a por debajo del rango
de sensibilidad.
No podemos dar un dato exacto, pero
podemos decir que es menor
de nuestro l铆mite inferior
es un menor para el 1,
dos har铆amos lo mismo a una
concentraci贸n, unos 50,
se sale de nuestro rango
de funci贸n detecci贸n.
Por tanto podemos decir que es
mayor de 100 mililitros
pero no podemos dar su
valor con exactitud
cu谩ndo vamos a las diluci贸n 1.500,
si entran rango cero 5,
vemos en qu茅 punto corta la recta
y calculamos la concentraci贸n,
que es aproximadamente veintiseis
nanogramos por litro.
Para el 1, tres ocurre lo mismo,
est谩 saturado, el uno 50 se sale de
escala por la parte de arriba,
con lo cual mayor de 100 mililitros
y para la 50 a vamos hasta
la recta de calibrado.
Y vemos a qu茅 datos de concentraci贸n
corresponde el n煤mero
y que se corta.
El eje es aproximadamente tres
con ocho nanogramos
mililitros bien,
pues ya tenemos los valores de
concentraci贸n en los pasillos,
y lo que tenemos que hacer ahora
es calcular la concentraci贸n en
la saliva del estudiante,
vale no en el pozo y yo sino
en la saliva original.
Si se acordar es para preparar
esta diluci贸n es.
Partimos de la saliva original,
hicimos una diluci贸n, unos 51.500.
Vale para para calcular
esa concentraci贸n
tengo que tener en cuenta
el factor de diluci贸n.
Entonces en el uno 1,
el de unos 50 tiene 38.000
nanogramos mililitro.
Por tanto,
en la saliva de es estudiante
tenemos ese valor que aparece,
en el multiplicado por el factor
de diluci贸n que hicimos valer.
En este caso de aqu铆 aqu铆
tuvimos 50 veces.
Si yo tengo el dato de concentraci贸n,
aqu铆 se multiplica por 50 para
saber la concentraci贸n.
En este caso ser铆a.
1900.
Nanogramos por litro en
la tabla que os dan.
Os piden la concentraci贸n
en microgramos.
Mililitro 煤nico que tienes que hacer
es convertir las unidades 1900.
Nanogramos mililitros son uno
con nueve microgramos
-mililitros para el estudiante
2, la saliva del alumno; 2,
tenemos la diluci贸n,
1.500; tenemos veintiseis nanogramos
1.000 litros, por tanto,
en la muestra original tendremos
veintiseis 1.539 1.000 nanogramos
mililitros por tanto 39 microgramos
por mililitro;
en el alumno; tres se hace
la misma operaci贸n
y el resultado son 5.700 nanogramos
mililitros que son
cinco con siete microgramos
mililitros en el caso
de la diluci贸n, es 1.500 del alumno;
uno en ese es menor de un y la
saliva es menor que ese valor
multiplicado por 1.500 vale,
ser铆a menos de 1.500.
En el alumno; dos ser铆a mayor de
5.000 ser铆a mayor de 5.000.
Hay otras cuestiones que puede
que os haya tocado
o no en relaci贸n a Al -al que
hay谩is hecho preguntas
que se pueden hacer como que ocurre
cuando los vol煤menes de anticuerpo
y captura son diferentes.
Cu谩les ser铆an los resultados
previstos?
Qu茅 ocurre si no se hace
el primer lavado,
si nos hace el segundo lavado o si
no se hace el tercer lavado,
cu谩les ser铆an los resultados o qu茅
ocurre si hay diferencias
en el volumen de las muestras o en
el volumen de la de del patr贸n
o bien de sustrato para todas
esas posibilidades,
que adem谩s son a veces errores
reales de la pr谩ctica experimental
ten茅is que os puede preguntar.
Cu谩les ser铆an las consecuencias
cuando ten茅is los valores
de observancia,
y a veces hay cosas que no cuadran?
Pues tienes que saber d贸nde
ha estado el fallo,
en que pas贸.
Os pod茅is haber equivocado y cu谩les
ser铆an las consecuencias?
De acuerdo?
Bueno, con esto terminamos, damos
por resuelta la pr谩ctica
y lo mismo cualquier duda
a mi correo Mar铆a,
me punta.