tv.um.es

Buenas tardes. En primer lugar, quería agradecer la organización por habernos invitado esta tarde a estar aquí con vosotros, explicarnos nuestra investigación acerca del uso de organoides impresión tres D y el uso del mecano ideología en la derivación de estos órganos en la placa de cultivo Mi nombre es Núria, Montserrat y trabajo; en el Instituto de Bioingeniería de Cataluña, en Barcelona, como muchos de vosotros sabréis. Las células madre pluripotentes que podemos derivar en el laboratorio, a partir de embriones humanos o mediante reprogramación, somáticas tienen la capacidad de dar lugar a los más de 200 tipos de células que tenemos en nuestro organismo, y esto es posible gracias a la existencia de protocolos de diferenciación que durante más de dos décadas en diferentes laboratorios se han ido poniendo a punto a la hora de intentar emular o copiar, cuáles son aquellas señales y mecanismos que las células reciben durante la especificación temprana y la formación de los tejidos? En el laboratorio tenemos el interés de entender cuáles son estos primeros procesos que dan lugar a la especificación temprana de tejidos, como el riñón o el corazón, con el fin de generar plataformas que nos ayuden a entender cómo se diferencian estas estructuras para poder llevar a cabo estudios modelado de patologías humanas, cuando pensamos en dar un salto más allá y generar estructuras que se parezcan de manera fidedigna a los tejidos o los órganos. Las estrategias de la bioingeniería nos pueden ayudar, controlar la diferenciación de estas células. Además, las células madre pluripotentes poseen una capacidad inherente, que es la de autoorganización y esta propiedad la hemos utilizado en los laboratorios para diferenciar células madre pluripotentes en tres dimensiones, generando pequeños cultivos bidimensionales que se asemejan al órgano que queremos que la placa de cultivo, que se denominan organoides, como las estrategias de bioingeniería, también permiten controlar de manera sistemática los estímulos bioquímicos, mecánicos que podemos ofrecer a las células a la hora de instruir su diferenciación. Con todo ello, en el laboratorio durante los últimos años, hemos intentado llevar a cabo estos estudios para entender mejor cómo se generan nuestros órganos para poder modelar la patología en humanos en esta idea positiva simplemente os quiero ilustrar cómo se diferencia o se forma el riñón en mamíferos para ello tomó ventaja de una esquemático publicado por la doctora en el que, como veis aquí el riñón deriva durante el amplio génesis de un tejido que se llama intermedio del inglés y terminé me ha hecho ver que recibe señales como o Efe, jefes de las o de la del tubo neural ácido. En este momento temprano del embrión génesis. Este tejido, denominado de soberbio intermedio, se anteriores o posteriores a lo tenéis aquí marcado en verde y amarillo, dando lugar a dos células progenitoras; renales, el metano el metano, mesa cae máquina amarillo o las células madre de la yema perdón en las células mesenquimales, golf con amarillo darán lugar después durante el desarrollo a todo el compartimento del riñón o las neuronas, y en verde las células madre de la yema, literal, dan lugar al sistema colector del riñón. Sabemos que la interacción íntima entre estas dos poblaciones es necesaria para la formación del riñón. Bien en el año 2012 en el laboratorio habíamos sido capaces de generar y de pacientes afectados de patologías renales, pero no teníamos procedimientos, para poder diferenciar estas células a ningún tipo celular del linaje renal. Para ello, lo que hicimos fue bastante intuitivo, simplemente estas señales que se comentado, que reciben las células durante la diferenciación o la formación del riñón en mamífero liberó. Dispusimos, capas de células madre pluripotentes altas concentraciones de fgc dos posteriormente, durante dos días, es pusimos a estas células a altas concentraciones de ácido, cuya actividad de esta manera conseguíamos en cuatro días. Generar células, que empezaban a expresar a nivel de rne, al mensajero y de proteína marcadores importantes del linaje renal. Aun así lo que quisimos hacer fue también demostrar la capacidad que tenían estas células a nivel de diferenciación ex vivo, y para ello tomamos ventaja de un ensayo que pusieron a punto unos investigadores en los años 1950. Describieron que si cogemos células perdonadme si cogemos tejido embrionario de ratón o de pollo y lo regamos y lo ponemos otra vez en cultivo en un sistema de cultivo órgano atípico podemos generar estos rudimentos que llamamos rudimentos renales. Que podemos cultivar en la placa de cultivo en un proceso que oscila entre cuatro seis días estos sistemas de agregación han permitido entonces durante más de 80 años poder estudiar cómo se forma y cómo se genera el riñón durante el amplio génesis. No únicamente en pollo sino también como comentaba en ratón. Nosotros lo que hicimos fue tomar ventaja de este conocimiento y agregar el 90 por 100 de células embrionarias de ratón con un 10 por 100 lulas madre pluripotentes no diferenciadas como veis aquí y como era de esperar no se formaba ninguna estructura similar a la situación. Control por el contrario. Cuando un 10 por 100 de las células que habíamos generado en el laboratorio proceso que. Como os he comentado. Duraba. Cuatro días. Veíamos que este sistema de agregación daba lugar a estos rudimentos ex vivo que fueron por primera vez los denominados organoides renales quiméricos además las células humanas utilizando un antivirus para la expresión de la proteína verde y podíamos observar cómo durante este proceso de cuatro a seis días las células humanas se podían localizar en la punta de éstas en las puntas de las yemas, durante el desarrollo que en este caso están marcadas en rojo para gratinar 8, que reconoce estructuras de ratón. Desde ese momento afortunadamente muchísimos laboratorios han trabajado en describir otros procedimientos para poder generar a partir de células madre, pluripotentes organoides de riñón en ausencia de células de otras especies. Cabe destacar que estos procedimientos oscilaban entre 20 30 días, que utilizaban, perdonarme que o copiaban las señales que reciben las células durante la génesis de nal en todos estos procedimientos; los investigadores tomaban ventaja de un protocolo que exponía a las células capas durante un proceso de siete a 10 días, posteriormente agregaba los progenitores banales y éstos eran cultivados en tres D, generando órgano y si cabe destacar que el trabajo de la doctora 2015 que público que en un proceso de 25 o 30 días eran capaces de generar organoides, de riñón, que transita, únicamente se parecían al riñón fetal del primer trimestre de gestación. En nosotros quisimos reponer o de alguna manera volver a proponer un procedimiento para generar organoides de riñón a partir de células madre, pluripotentes humana. Para ello, nuestra hipótesis de trabajo fue que si éramos capaces de generar un progenitor renal en un tiempo corto y este progenitor renal, una vez caracterizado, lo pudiéramos agregar en tres D, a fin de emular cómo se diferencian las células. En el embrión seríamos capaces entonces de forzar las interacciones de una célula y las interacciones de la célula con la matriz esta célula, y que ello daría lugar a la generación de organoides, de dueño en un tiempo moralmente más corto del que se había descrito hasta la fecha, probablemente generando órgano y desde una mayor calidad en términos de diferenciación. Aquí os explicamos de manera esquemática cual fue este procedimiento para la diferenciación, como comentaba en cuatro días. Generamos un progenitor renal utilizando señales, inductores que promueven la señalización endógena de las células. También expondremos las a un tiempo corto a señales como divina. A y posteriormente estos esteroides se cultivan en tres dimensiones para este trabajo. Utilizamos un cultivo, órgano típico y los esteroides, se expusieron posteriormente a factores como inductores de la señalización por el día ocho de la diferenciación en tres dimensiones, sacábamos del medio de cultivo todos los factores a fin de comprobar que de manera autónoma los esteroides eran capaces de dar lugar a organoides de riñón, que como veis aquí contenían múltiples segmentados que expresaban marcadores del compartimento como el hogar y del compartimento tubular; además, tomamos ventaja de la secuenciación de masiva, y pudimos determinar que los organoides generados en este período de 16 días, mediante estas modificaciones, que somos explicado, se parecían o eran tránsito únicamente similares al riñón humano. En segundo trimestre de gestación, además, como se comentado, a nivel de expresión, proteica, utilizando química y microscopía focal la expresión en estos organoides generados en 16 días, para marcadores de compartimento del túmulo discal, lo le lo proximal y compartimento siempre comparando estos hallazgos con los que encontrábamos en el riñón fetal humano del segundo trimestre de gestación. Cabe destacar que, pese a la importancia de estos hallazgos, éramos capaces de generar células de origen vial, como veis aquí marcadas en verde para el marcador de 34, pero que estas células no se encontraban en ningún caso incorporadas en las, en las aglomeraciones de los que teníamos en los organoides, en la agenda para de una manera similar a como observamos, por ejemplo en esta muestra control de riñón humano del segundo trimestre de gestación. Como veis, aquí los, en este caso marcados para el marcador verde, están en contacto con células epiteliales en rojo, marcadas para el pelo para el factor derby -lanza para ello entonces. Nuestra hipótesis de trabajo fue la de pensar en un nuevo sistema que nos permitiera proveer un compartimento y al órgano, pero que estuviese organizado de la misma manera que lo encontramos en vivo durante la gestación, tomamos ventaja otra vez de un sistema que, como ves no es nada moderno. No es nada nuevo, pero nos encanta. Además comentar estos estas aproximaciones en nuestras ponencias porque siempre creemos que es importante dar un paso atrás y mirar mi biografía, que es lo que han hecho anteriormente. Los autores, como sabéis, el sistema de la membrana del pollo es un sistema que permite estudiar en este caso la formación de vasos en el huevo y nuevo, y, de hecho se ha visto que esta membrana extra embrionaria altamente vascular y sirve para crecer por ejemplo, células tumorales y también para testar biomateriales entonces pensamos por qué no utilizar este mismo sistema para implantar nuestros organoides y ver durante el transcurso corto entre tres cinco días si somos capaces de explotar. Esta este ensayo, como si fuera un pequeño reactor y poder organizar la escultura endógena, organoides y también ver si somos capaces de generar o promover el crecimiento de los organoides y no en el huevo, este es el ensayo, simplemente hacemos una ventana en la que el órgano y de cerca de pasos que sean relativamente pequeños cerramos otra vez el huevo con celo. Lo volvemos a poner en el jugador y en este caso lo que hicimos fue inyectar en este caso de extraño marcado en verde y veíamos como un período muy cortito, 3, cinco días. La escultura del pollo entraba en el órgano y de humano, que aquí simplemente tenemos. El marcaje con pero podemos distinguir las estructuras celulares. Cuando analizamos este y otros muchos organoides implantados en este caso, utilizando simplemente la toxina y comparando las observaciones con organoides, veríamos que las estructuras habían crecido, y cuando analizamos secciones consecutivas como esta para el marcador 34 en verde y magenta, ahora sí podemos ver cómo las células están en contacto íntimo con los que se han generado en el órgano, y no únicamente hicimos este marcaje, utilizando un anticuerpo específico para células humanas, sino que además también utilizamos el marcador uno como marcador específico contra el núcleo de células humanas, aquí en magenta. Como veis, estos hallazgos nunca nos encontrábamos cuando organoides in vitro. Es decir, cuando no dábamos ese estímulo de flow que podemos utilizar haciendo uso de la del ensayo del pollo, quisimos dar un paso más allá y entender también, pues si no únicamente el perdonadme es que hablando en inglés y castellano me cuesta un poco el. El flujo de fluido era capaz de subir esta vascularización y ordenar estos vasos mejor, sino que también quisimos entender si éramos capaces de utilizar otros factores como la. La. La dureza no la mecánica del tejido para instruir mejor la diferencia y que hicimos en colaboración con dos profesores. Instituto, doctor Xavier Trepat; medimos la dureza de la membrana del pollo y comprobamos efectivamente, como era de esperar, que la dureza de esta membrana era muy dura. Pues bien, lo que hicimos en el laboratorio entonces puede generar es en este caso utilizando la acrilamida de una pureza similar a esta dureza que explicado, que identificamos en la membrana del pollo, que es entre uno uno con dos kilos grabamos en estas, en estas, los sustratos los progenitores nacionales, comparando también con sus tratos con dureza mayor en este caso 10 60 kilos vasca, les generaba organoides, que veíamos que en el caso de haber sido generados a partir de progenitores derivados en un sustrato blando, presentaban un mayor número de que además aparecían antes el proceso de la diferencia cuando implantada estos organoides generados en un ambiente blando además, veíamos es un ejemplo de trabajo que que publicamos, que nos en este caso decimos en inglés no son como tal sino células. Que se parecen a los ovocitos nativos pues estaban dispuestos emulando bastante bien no tenemos en secciones por ejemplo en este caso control de riñones, segundo trimestre de gestación. Como vemos, aquí se formaban estructuras de celos primarios y secundarios. Con la presencia de estas estructuras, que veis aquí que se llaman Street Day afán que son bueno que nos indicaban, no habíamos podido generar de una manera bastante fidedigno organoides, que contenían células, que estaban más diferenciadas al utilizar estos tratos que ofertaban. Pues esta, esta dureza, más landa, no únicamente estamos focalizados en ofrecer estímulos controlados, como la dureza, sino también en entender si somos capaces de poder generar materiales nuevos a partir en este caso de Madrid desde humano, y por qué tenemos este interés es porque es bien sabido que la matriz extra, celular o un papel importante, muy importante, durante la diferenciación y la génesis pero también durante la enfermedad y se ha descrito de hecho que utilizar matrices combinadas con células madre pluripotentes, ofrece una buena plataforma para poder instruir mejor. La diferenciación, debido a las características de estas de esas matrices celulares como la bioquímica, sino que se llaman inglés, que es esta la presencia de estas proteínas de la masa celular que ayudarían a instruir mejor la diferencia debían ser un proceso que oscila entre siete nueve días. Hemos puesto a punto diferentes procedimientos para generar en este caso tejido celular, concretamente del córtex terrenal. Esto es, simplemente son diferentes funciones en las que comprobamos el tejido nativo y, una vez analizado, para ver que somos capaces de preservar la macro estructura y después también la la otra estructura, pero lo que nos interesa a nosotros, como comentaba, es realmente generar hidrógeno a partir de esas patricia celulares para poder obtener materiales, para aplicaciones, por ejemplo, en impresión tres Don Este sería nuestro proceso para obtener estos que podemos caracterizar mediante biología, mediante también con microscopía segundo, armónico cuando ahora utilizamos esas nuevas formulaciones, en presencia o en ausencia de ésta, de este hidrógeno derivado a partir de matriz. Lo que vemos es que estas imágenes realmente tienen un potencial amplio abanico mucho mayor cuando presentan no pues esta esta nueva formulación además estamos como comentaba poniendo a punto diferentes procedimientos de los que utilizamos para generar neuronas, por ejemplo, en dos D, pero también mediante el uso de la impresión tres D a día 4. Lo que hacemos es que utilizamos estos hidrógeno con nuestros progenitores, nos mezclamos y en la impresora somos capaces de generar estos esteroides, que mantenemos en cultivo y que ahora, después de un tiempo trabajando con ellos, no podemos que expresando marcadores importantes para los diferentes compartimentos renales y algo importante es que hemos conseguido pasar de la escala a la escala milimétrica, a la hora de generar estos organoides. Además, cómo vais a que las estructuras vasculares no, o los vasos que vamos generando mediante el uso de estos hidrogenadas? Pues vemos también que son más complejos y estamos ahora muy focalizados en ver esta capacidad, no y esta vascularización endógena de los organoides, en el laboratorio, al utilizar estas células madre, pluripotentes y como muchos de los que estamos trabajando en nuestro país. No controlas, madre tanto embrionarias como pues sabemos que una de las grandes ventajas de este tipo celular es que permite trabajar y realizar modificaciones genéticas, utilizando en este caso la tecnología de expertas nueve o la tecnología de las talent, Dabo a su gran capacidad para ser manipuladas a nivel de célula individual, y en su día un investigador de mi laboratorio lo que demostró era que se podía introducir el chef Arbós locos de estas células un cassette que ocupaba en este caso los dos alelos de un loco es que se llama a ver a de segundo, que básicamente al hacer esta modificación en las células y traduciendo esta caseta, que estaba controlada por el promotor de Tom podía generar células pluripotentes que mediante el uso de minas para la expresión de Cas9 y la inspección del de interés se podían generar células con single doble no caduca y con ingeniería genética, pues de precisión en el laboratorio- federico durante los últimos años lo que a lo que ha venido haciendo ha sido una nueva construcción. No hubo Caser para poder expresar en un único constructor, pues estos elementos no nueve bajo el control detector y en este caso hemos generado líneas que son, o para la expresión de este caseta, una vez hacemos una inspección, podemos escindir algunas partes de esta caseta, y ahora sí tenemos líneas celulares, tanto como células madre pluripotentes o para la expresión de esta caseta, que nos permite de manera bastante robusta, pues poder realizar modificaciones en células madre, pluripotentes, os voy a explicar brevemente una de estas modificaciones. Tendremos unas líneas en las que tenemos estas líneas, pero botas que nos permiten diferentes, que podemos sintetizar en el laboratorio mediante adscripción o también comprarlos, evidentemente, a diferentes compañías como, pero lo que nos interesa es que somos capaces de generar días no cauces estables para muchos marca, para muchos genes, que son importantes en este caso como ejemplos explicamos aquí para marcadores de riñón, pero hemos realizado este ejercicio en diferentes proyectos, como en proyectos relacionados con carcinoma renal, célula clara, proyectos y tumores renales o tumores o enfermedades raras. Este simplemente es un ejemplo para, para la generación de caos estable en este caso. Para la paralicen 1, que es el responsable, en caso de estar mutado de estos tumores pediátricos renales ingestión, como veis aquí en el día 12 de la diferenciación, la línea expresa los marcadores que debería expresar en condiciones normales, verde pastos en rojo y en la situación de caos. Como veis, aquí ha expresado y las las células que expresan pastos pues bueno, no. No quiero entrar al detalle, pero no están dispuestas tampoco de la manera esperada, que nos han formado vesículas renales en el momento de la diferenciación del día en la situación controló un órgano y desde el día 20, como veis aquí expresa uno en las células que se dicho que son parecidas a los de color rojo. Las estructuras parecidas a las células tubulares las marcamos utilizando una tina Lotus atacó Bush Láctea. Como veis aquí en verde, y en este caso hacemos un marcaje para aquí en blanco que su marcador de membrana de estos ovocitos en la situación de caos vemos que no hay expresión de. Como cabría esperar tampoco, y las estructuras tubulares que presentan estos organoides son pajitas no lo que hemos visto después de realizar muchos estudios. Utilizando estos organoides es que podemos recapitular tipos importantes. Los que, como los que observamos en muestra nativa de este tipo de tumor, no voy a entrar mucho más al detalle en el laboratorio, tuvimos la suerte de poder participar en un estudio en plena pandemia explotando la tecnología de los organoides para, en este caso, entender por una parte, como el virus sars, CoV dos infectaba, las células de los organoides, y también para aprobar y validar el uso de un compuesto terapéutico que es una proteína soluble para hace dos ver si podíamos de esta manera realizar un tratamiento in vitro para ver si podíamos bloquear la expresión de Abidal y de esta manera parar la progeria, los organoides, no, primero que hicimos o poner a punto un procedimiento totalmente nuevo y suspensión, e hicimos un perfil por secuenciación de Rennes a nivel de célula única sin en colaboración con el doctor Felipe Próspero. Lo que veis aquí en este este Umar es bueno en las diferentes clases que aparecen a día 16 de la diferenciación, utilizando estos organoides. Pero lo que nosotros solamente teníamos interés en comprobar era que las células que expresaban hace dos o si efectivamente eran las células, que se parecen a las células del túmulo, proximal, del riñón nativo y también, como veis aquí algunas células se parecen a los ovocitos renales. Es interesante ver que en un proceso, entonces de 16 días, pasamos de tener unas células totalmente indiferencia a generar estas estructuras tridimensionales que expresan el marcador hace dos allá donde correspondería un riñón nativo procede a enviar estos organoides a nuestro colaborador Karolinska Institute, Suecia ya había empezado a propagar virus sars, CoV dos de biopsias de pacientes afectados por Suecia, y había realizado algunos estudios genómicos, y cuando nos los organoides renales, que generamos en el laboratorio mediante estas suspensiones virales; veíamos cómo éramos capaces de detectar el virus y que además es amante de organoides renales. Infectados era capaz de infectar más organoides y también células 6, demostrando entonces que la plataforma de los organoides nos ayudaba también a generar progeria Vidal, que representaba un modelo para estudiar el mismo del virus cuando ganábamos organoides. En presencia de este compuesto terapéutico, la proteína recombinante soluble parace 2, veíamos que había una disminución, no en este caso, dosis dependientes, frente al tratamiento, utilizando este compuesto, cabe citar que además utilizamos este compuesto, en otro ensayo, en pacientes y estos ensayos se publicaron hace relativamente poco. En otras revista científica nosotros hemos querido, además, dar un paso más allá y gracias a las ayudas del Fondo Covid, 19 del Instituto Carlos tercero. Solicitamos un proyecto en el que intentábamos explotar los organoides, en este caso, para entender si había una relación causal entre los desajustes que se producen en condiciones, por ejemplo, como la diabetes y la infección por sas, coptos cuando solicitamos a esta ayuda el año pasado, en abril, había pocos datos, pero ya indicaban que los pacientes con diabetes tipo dos tenían una mayor, una peor. No es peor, una peor; en peor; Covid 19. Hoy en día nuestra hipótesis de trabajo vemos que desafortunadamente, se está cumpliendo porque hay muchos pacientes covid 19 que desarrollan además diabetes en este caso tipo uno después de la infección Entonces nosotros solicitamos, como comentaba, este proyecto en colaboración otra vez con el doctor Joseph. Tengan en Austria el doctor unanimidad, en el que quisimos entender, por si éramos capaces de explotar la plataforma de los organoides, para entender esta interacción entre los desajustes del metabolismo y la infección. Por en el laboratorio veníamos trabajando hacía casi tres años en establecer un procedimiento que, de manera fidedigna, nos ayudase a entender, pues la neuropatía diabética, el riñón diabético, y para ello habíamos puesto a punto un procedimiento, en el que poníamos organoides a concentraciones oscilante de glucosa de cinco a 25 en un proceso que duraba una dura, una semana, haciendo cambios de medio, cada 12 horas, y la condición que decimos de es la exposición a glucosa, cinco haciendo esto. Vemos que hay un compromiso en cuanto a la diferenciación de los organoides, si miramos los diferentes marcadores clásicos que utilizamos para compartimento tubular en este caso, o para el compartimento a nivel de proteína y a nivel también de mensajero. Pero qué ocurre si miramos otros del riñón diabético? Vemos que la condición de glucosa oscilante no está ahí oscilante en esta condición. Aquí en rojo hay una mayor posición de fibras de colágeno y, además, también hemos hecho muchos estudios a nivel proteico que determinan la expresión de colágeno cuatro colágeno, tres hurones tina, etc. Quisimos, además evaluar si, como se había descrito, por ejemplo, en este caso en estudios, en humanos, pero también en ratones no esta condición genética incrementaba la expresión de hace 2. Como veis, aquí en imágenes de microscopía Infocal, cuando miramos la condición, es decir, exposición a 5, la glucosa o la condición de, y oscilante 25 que hemos llamado para el trabajo, hemos querido una mayor expresión de hace dos aquí en verde por microscopía Infocal también por serlo también a nivel de mensajero, y que la vida media del mensajero de hace dos es más larga en la condición. Y qué ocurre cuando detectamos estos organoides y nos fijamos en los tiempos cortos? No ocurre cuando haya una infección en estos organoides, que, ya que llamamos diabéticos no. Pues bueno, comprobamos mediante el uso de sin cansan trenes que hay diferencia, como habíamos visto a nivel de lo que serían los casters, los tipos de células; que podemos identificar a nivel de marcadores, que esto es interesante, o sea, no hay un cambio en lo que sería la diferenciación y el estado de diferenciación, pero si hay un cambio a nivel de que hay más expresión de del virus en la condición de 25.000 además cuando analizamos organoides de éste y muchísimos otros experimentos que hemos realizado en el último año, vemos que la proteína de la del virus aquí en rojo en pie está más expresada en la conducción, que emula esta condición de abetos génica y que en ambos casos después de la infección como ya se había descrito, hay una bajada para la expresión de hace dos endógenos acuerdo, hemos realizado días en este caso no para hace dos mediante nuestra plataforma les he explicado anteriormente Cas9. Como veis aquí somos capaces de generar líneas para hace 2, te expresan. Como veis aquí en estas imágenes hace dos en células, que son positivas, es decir, en células del compartimento del túmulo proximal, del segmento uno del tubo nos aproximan a nuestros organoides, y esto no ocurre como cabría esperar en organoides, no cabe a nivel de proteína, únicamente por microscopía focal, también por a nivel también de mensajes. Es interesante y es algo que nos queremos que nos pareció muy oportuno, que no hay un impacto significativo en cuanto a la generación de este caos y la diferenciación de los organoides. Hemos trabajado con diferentes líneas que hemos infectado, primero en condiciones de 11 mínimo, que es el medio que utilizamos para la diferenciación, y vemos que los organoides, pues, efectivamente, una vez infectados en rojo, expresa no esta proteína del virus snp, los organoides como cabría esperar hasta la fecha, pues no tenemos constancia de un estudio similar utilizando organoides humanos, pues las células de efectivas para hace 2. No se infectan; no por por el virus? Esto lo podemos también observar en estas imágenes, no de microscopía electrónica, de transmisión dónde somos capaces de detectar partículas virales en el microbio apical de las células parecidas al tubo distal también hacerlo las próximas y también en compartimentos en dos males. De las células. Para acabar con la presentación hemos podido utilizar células de pacientes diabéticos y tejido sano, es decir, a partir de biopsias renales, perdonarme de tejidos sano y de tejido de riñón diabético. Hemos establecido cultivos primarios de células tubulares que hemos caracterizado a nivel metabólico, a nivel de expresión de diferentes marcadores metabólicos, y vemos cómo las células diabéticas se infectan más aquí otra vez, utilizando esta proteína en el marcaje, perdonarme para la proteína y también a nivel de mensajero, buenos por haberlos convencido de que los organoides realmente ofrecen ventajas frente a otros sistemas como para poder entender cómo se generan los órganos de los tejidos en humanos y también para establecer plataformas que nos ayuden a entender la patología en humano. En esta tecnología de los organoides es relativamente nueva y nosotros pensamos que utilizar la bioingeniería pues está dando buenos resultados a la hora de intentar inscribir mejor señales bioquímicas, y también señales físicas que las células reciben en el tejido que queremos estudiar además mediante el uso, en este caso de la tecnología Cercas nueve en el laboratorio, pues tenemos ahora una plataforma, una ventaja para poder estudiar patologías que no únicamente acontecen en el riñón, sino también en el corazón y en la retina. Son otros de los modelos que utilizamos y desarrollamos en mi laboratorio. Yo quería agradecer muchísimo a los miembros de mi laboratorio. Yo creo que está claro que sin ellos pues nunca podríamos explicar absolutamente nada de lo que hacemos. Por supuesto, las agencias financiadoras a los colaboradores en España Felipe de veces que también dará una charla si no me equivoco durante el día de mañana los colaboradores internacionales y las agencias financiadoras que nos han permitido estar aquí hoy con vosotros y muchísimas gracias a todos por vuestra atención y espero recibir un montón de preguntas que yo estoy encantada siempre de contestar. Muchísimas gracias.