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Muy buenas tardes. En primer lugar, lógicamente quiero agradecer a los organizadores desde este curso a la decimoquinta edición de terapia celular, fundamentalmente al profesor Moraleda, que es el impulsor clave del curso, pero también por supuesto a nuestro García Olmo y Martínez, y simplemente desear que la próxima edición de una manera definitiva sea finalmente presencial en los Alcázares, como en los años anteriores a estos dos últimos, y que podamos recuperar la gran ventaja que tiene este curso de estar juntos profesores y alumnos en un entorno estupendo de intercambio de ideas y de discusión, que es la parte fundamental y que desafortunadamente a se pierden muchas veces en tanta reunión virtual de las guías. Empezamos realmente estar un poco yo diría que nos cansados, pero con ese deseo fundamental de vernos, de tocarnos y de darnos a conocer adjunto sí hacer las preguntas, y ese contacto directo es una de las claves de este curso. Entrando ya en lo que me corresponde desarrollar en los próximos minutos, charlas breves, porque no le exige es hablar un poco de las vesículas intracelulares, como como un potencial terapéutico adicional, y quizá distinto quizá mejor sabemos que está peor que las células mesenquimales, pero desde luego tenemos que estar atentos, y los que estáis en el curso es clave también tenerlas esa capacidad plástica de entender que quizá hay una buena línea de trabajo relacionada con vesículas celulares y tenemos que estar atentos a sus resultados en los próximos años, lo que voy a desarrollar en el esquema en los próximos minutos, y ensamblar un poco como los investigadores en células mesenquimales. Hemos venido investigar también en vesículas intracelulares y poner algunos ejemplos de trabajos en los que estamos colaborando con otros grupos en el uso de las vesículas. Estas células procedentes de células mesenquimales en la mejora del injerto Mato poético, una aplicación de medicina regenerativa, que es la reparación de los cardiomiocitos, que han sido dañados por el Modelo Estándar, y clínicamente muy relevante, porque hay muchos pacientes con distintos tumores con mama, con malignas que reciben estos fármacos perdido tóxicos. Luego, acabar de una manera muy, muy breve, mencionando más que detallando algunas colaboraciones que estamos haciendo en el contexto de la red con celulares, algunas de ellas, en cuanto a la primera parte de la mesenquimales, la vesícula bueno, pues el curso se centra en una buena parte, por lo menos en la parte inicial, en el desarrollo de potenciales aplicaciones de estas células mesenquimales. No sabemos y sabe muy bien que las mesenquimales solo un medicamento de terapia avanzada que han de ser producidas en condiciones de normas de correcta fabricación en unidades de producción celular, que ha sido ser por las agencias reguladoras y, por lo tanto, están sometidas a todas las legislaciones. Regulación tienen que ver con los medicamentos, no sabemos muy bien las vesículas, son productos biológicos que quizá a nivel regulatorio puedan tener una ventaja sobre las células, lo vamos a ver un poquito más adelante. Nosotros, nuestro grupo y y muchos de los patólogos que estamos trabajando en enfermedades injerto contra huésped con mesenquimales, llevamos una línea de trabajo de muchos años; también hemos empleado las células mesenquimales para la mejora del político, y esto es muy lógico porque las células mesenquimales son progenitoras son claves para la mejora del incierto y luego también en la reparación de distintas complicaciones post trasplante que tienen que ver con daño tisular, por ejemplo, la hemorrágica, y ahí estamos utilizando las células. Las células han demostrado al menos en ensayos fase 2, que hay una ventaja en la supervivencia para aquellos pacientes que alcance una respuesta completa, y esto se ha visto en los ensayos fase dos luego con respecto al incierto, pues hemos visto que la administración con células se mató poéticas células mesenquimales tanto por vía intravenosa, pero mucho más si se administran por vía mejoran en modelos de trasplantes, y esto nos ha llevado a utilizar en algunos pacientes, concitó el trasplante, tratamiento con células mesenquimales para mejorarlas y que es otra de las complicaciones que vemos en gran parte a estos efectos que desarrollan las células mesenquimales. Tienen que ver con su función, inmune, modulador y en otras de las clases de este curso se explica muy bien cuáles son algunas de estas interacciones. Lo que quiero resaltar es que ya en estos esquemas de los últimos años se tiene muy en cuenta que parte de estos efectos no son solo por interacción célula a célula, sino también por la liberación de exosomas o de vesículas celulares, si es que las células mesenquimales, actúan no únicamente por contacto célula célula, sino que también actúan, como se ve en este esquema. Por secreción de factores solubles, y más recientemente, dos mecanismos digamos, más modernos y más interesantes. También de transferencia y de comunicación. Intracelular es, por una parte, la emisión de estas vesículas intracelulares, y, por otra, también la emisión de nanotubos. Son estructuras tubulares, que se forman entre dos células y que permiten incluso el intercambio de mitocondrias. También hay grupos trabajando con vesículas celulares de gran tamaño, donde se ha visto que potencialmente, también se transfieren, mitocondrias de unas células a otras, y esto abre el campo de la campo, también muy interesante en la modificación celular por este tipo de mecanismos. Más moda, dado que las células se emplean las células mesenquimales como tratamiento la enfermedad contra receptor aguda refractaria y están aprobadas en algunos países, no en la Unión Europea ni en Estados Unidos, pero sí en Japón y Nueva Zelanda y Canadá pues algunos grupos sin grupo europeo ya hace bastante tiempo, aunque luego no se han desarrollado estos ensayos clínicos, publicaron un primer caso clínico de un paciente con enfermedad injerto contra receptor aguda refractaria, después de un trasplante con afectación, cutánea y afectación digestiva, y que respondió al menos parcialmente a la administración de exosomas; decían ellos. Un subtipo de celulares procedentes de células mesenquimales es una primera prueba de concepto in vivo de que realmente probablemente esta estrategia terapéutica sea útil y merezca la pena seguir adelante, evaluando su posibilidad terapéutica. Insisto, bueno, y qué son realmente. Las vesículas celulares son estructuras micro, con una membrana, y que contienen una serie de moléculas vía divas. Hay, digamos, que dos tipos fundamentales de vesículas celulares alguno más que vamos a ver a continuación, y trataremos de definirlos, quizá por su función, por su tamaño, por su origen globalmente. Estas vesículas extra celulares tiene unas potenciales ventajas. Sobre las propias células mesenquimales que las liberan, es decir, que las vesículas celulares son un mecanismo de comunicación interna celular entre múltiples tipos celulares y prácticamente todas las células eucariotas, liberan, vesículas, celulares, aunque aquí nos centremos exclusivamente en la presentación, en el estudio de las aplicaciones potenciales de aquellas que son liberadas directamente de entrada, ya ha anunciado antes. Probablemente a nivel regulatorio las vesículas, intracelulares, no sea médicamente terapia avanzada, y esto tiene una serie de ventaja desde el punto de vista de permisos para su utilización y luego para su explotación comercial al no contener a no tener capacidad de división, pues evidentemente no hay riesgo de día o de anormalidades; cromosómicas a diferencia de las células son fácilmente y y y almacenado es a largo plazo como son pequeñas atraviesan la barrera hematoencefálica y otras barreras relevante también con fines terapéuticos, las células mesenquimales y luego se pueden inmortalizar y son muy fácilmente notables. En cuanto a su capacidad de industrialización y producción a gran escala, y yo diría que estas son fundamentalmente las ventajas principales, ahora vamos a entrar dentro de la presentación, en una parte un poco difusa, y es esa difusión. Esa dificultad, esa variabilidad la que quiero que quiero entrar para el aislamiento y para la caracterización de la que no voy a entrar en grandes detalles, pasando algunas ideas positivas simplemente para que veáis la dificultad y las diferencias, y cómo influye la metodología de aislamiento, en lo que puedan ser los aspectos bueno, pues, de entrada consideramos algunos subtipos de vesículas celulares basados en su tamaño. Por una parte los exosomas, que son las estructuras más pequeñas, 3.050 micras, estarían lo que llamamos micro vesículas, que hay un rango amplio entre las 50 los 1.000 nanómetros aproximadamente. Hay vesículas más grandes y los cuerpos son más grandes y, bueno, realmente esta es una forma de clasificarlos. Los exosomas realmente derivan de estructuras en 2, mientras que las vesículas derivan directamente de la membrana plasma, y también su contenido es probablemente diferente. No terminamos de tener claro si hay que purificar exosomas, hay que generar distintos subtipos conjuntos de vesículas extra celulares. Pero digamos que lo que globalmente contienen estas estructuras son desde proteínas o citoesqueleto enzimas micro, mensajeros. Lípidos. Todo esto tiene que ver con su función y también tienen estructuras, moléculas concretas y típicas de su membrana, como pueden ser algunos de los lípidos, algunas proteínas y otras proteínas membranas esto es relevante conocerlo y también obviamente la membrana contiene marcadores de la célula de origen distintas técnicas. Yo diría que hay precipitación de polímeros, selecciones magnéticas cromatografía, cada una tiene su mecanismo, cada una produce vesículas distintas con pequeñas modificaciones, por lo tanto, perdiendo como una loa al final resultó ser distinto. Digamos que globalmente la mayor parte de los trabajos utilizan ultra centrífuga. Aquí hay algunos ejemplos de aislamiento e insisto que cada forma de aislarla tiene sus ventajas y sus desventajas, está intentando caracterizar y definir cómo debe hacerse para los trabajos, para que haya una mínima comparable entre unos y otros y, como decía, un detalle importante. Los marcadores de membrana de las células mesenquimales obviamente están presentes en las membranas, de las vesículas intracelulares, dentro de la caracterización se puede hacer por 100 de su ojo, nosotros utilizamos unos bits para ver realmente el tamaño que tienen las vesículas y compensar adecuadamente el metro. También se pueden ver por microscopía electrónica? Por la expresión de algunas de esas moléculas clave que están en su membrana, que son las que son las y luego una técnica que se llama el nanopartícula análisis, que nos mide un poco la el tamaño medio de estas vesículas, que nos permite conocer cuál es el contenido de lo que tenemos, y aquí en muchos de nuestros experimentos, estamos, moviéndonos, en el entorno de las 100 pico micras en que las hemos usado, insisto, problemas de injerto, y voy a presentar este trabajo en algunos problemas de daño tisular, y estamos utilizando las modelos en un contexto de complicaciones del trasplante con otros grupos que hemos querido hacer en este primer trabajo. Bueno, pues sabemos que la célula poética para insertar tiene una serie de propiedades y que cuando ponemos células mesenquimales lo hemos visto antes mejoras en este trabajo. Nos planteamos si incorporando a las células de 34 vesículas estas células mesenquimales, les aportaban propiedades que permitieran tener un mejor injerto Mato poético. En modelos de trasplante, entonces celulares las incorporamos a células de 34, después miramos los cambios que se producían en estas células, y lo más importante, si había consecuencias funcionales en las 34 cuando incorporaban las vesículas celulares frente a células de 34 basados. En resumen, la caracterización es que, evidentemente, hay diferencias en la expresión génica, en las propias células, que incorporan más, frente a las que no, quizá había un aumento de genes antiguo, sino una disminución de los tópicos, la consecuencia fundamental es que aumenta la viabilidad de la célula poética. No hay diferencias importantes en proliferación, pero también aumentan algunas moléculas de adhesión y injerto, y cuando medimos el injerto in vitro. Estas células, de 34 que han incorporado vesículas, celulares, tienen una mayor capacidad, crono, génica, una mayor capacidad poética, y cuando las en modelos in vitro, perdón, in vivo, en modelos de trasplante, utilizando células de 34 que han incorporado vesículas o no. Las células mesenquimales, y las ponemos por vía en animales inmunodeprimidos, que han sido irradiados para el injerto. Bueno, pues vemos que estas células de 34, que han incorporado las vesículas, tienen una mayor capacidad en otros modelos. Hemos testado como la adicción a los cardiomiocitos, que han sido dañados por una mejora, su capacidad funcional. Se incorporan los cardiomiocitos, estas vesículas estas células mesenquimales y fijados aquí como cuando ponemos los cardiomiocitos, cómo aumentan el infarto de miocardio, y la toxicidad y cómo la la incorporación de vesículas intracelulares mesenquimales, disminuye esa liberación de como la disminuye los latidos in vitro, que tienen las células, los cardiomiocitos, y que esta disminución de los latidos es recuperada cuando se añaden vesículas extra celulares y de nuevo hay menor toxicidad menor, es decir, los dos hijos reactivas de oxígeno cuando se añaden vesículas, celulares a camiones y dañados por y menor daño que colaboraciones. Estamos haciendo ahora el contexto del tercer, bueno, pues, utilizar vesículas, intracelulares directamente en nuestros modelos animales de enfermedad, injerto contra receptor, viendo la capacidad educadora y comparándola con la de las células, como reducen también esta proliferación de linfocitos activados, cómo tiene que ver a veces con la dosis y en otros modelos? Con con Rosa Yáñez hemos visto que pueden tener cierto papel y luego estamos trabajando también con de Murcia, con David y con el profesor Moraleda en ver cuáles son las propiedades de vesículas intracelulares, que han sido y hemos visto que las vesículas de células pueden mantener la situación y, por lo tanto, tener una mejor distribución en los tejidos durante al menos una semana, y estos son datos de David que presentará una comunicación oral en el último congreso como estas vesículas intracelulares procedentes de células mesenquimales, aportaban una ventaja con respecto a las vesículas de células basales en el tratamiento, en la supervivencia y en el tratamiento de la enfermedad injerto en estos modelos animales y sin más, porque no quiero pasarme de estos minutos que tenemos para la reunión sin más, pues agradecer a toda la gente que está en el curso y organizando también por la invitación y por todas las facilidades que nos dan a todos los que estáis interesados por este curso. Insisto que y hacerlo tan bien cuando no sea virtual, y estaré encantado de conectar mi poder participar en la discusión de esta mesa y sin más, muchísimas gracias.